Saponin là một trong những thành phần của các loại thảo dược có hiệu quả rất tốt cho sức khỏe vì vậy trong các công trình nghiên cứu sử dụng nhiều phương pháp để định lượng saponin trong chất chiết xuất từ thực vật tuy nhiên việc định lượng này phải cần đến dung môi nhưng có rất nhiều bất cập với các loại dung môi như axeton, metanol và n-butanol và từ đó Thuốc thử vanilin sulfuric ra đời vậy chi tiết như thế nào hãy cùng tham khảo bên dưới đây với Ttdccomplex nhé !
Thuốc thử vanilin sulfuric là gì ?
Saponin là một nhóm đa dạng các hợp chất phân bố rộng rãi trong giới thực vật, được đặc trưng bởi cấu trúc của chúng có chứa aglycone triterpenoid (C30) hoặc steroid (C27), và một hoặc nhiều chuỗi carbohydrate. Các đặc tính hóa lý (ví dụ, chất hoạt động bề mặt) của chúng , cùng với bằng chứng gắn kết về các hoạt động sinh học của chúng (ví dụ, hoạt tính chống ung thư và chống cholesterol) , đã dẫn đến sự xuất hiện của saponin như là những hợp chất quan trọng có ứng dụng mở rộng trong thực phẩm , ngành mỹ phẩm và dược phẩm .
Đối với các hoạt chất sinh học thực vật khác, việc nhận ra tiềm năng của saponin đòi hỏi các phương pháp mạnh mẽ để chiết xuất hiệu quả chúng từ nguyên liệu thực vật, để dễ dàng định lượng chúng trong chất chiết xuất và để xác định cuối cùng các saponin riêng lẻ. Nhiều phương pháp đã được phát triển để phát hiện và đo lường saponin trong các sản phẩm thực vật; chúng có thể được phân thành hai loại chính ,
- Phương pháp đo quang phổ , cho giá trị hàm lượng saponin tổng (TSC)
- Phương pháp sắc ký, để định lượng các hợp chất saponin cụ thể .
Đối với phân tích TSC, một phương pháp đo quang phổ được đề xuất bởi Hiai et al. Đã trở nên phổ biến để phát hiện và định lượng saponin trong nguyên liệu thực vật , phần lớn là vì nó đơn giản, nhanh chóng và rẻ . Phương pháp này được gọi là thử nghiệm axit vanilin sulfuric vì nguyên tắc cơ bản của phương pháp là phản ứng của saponin triterpene oxy hóa axit sulfuric với vanilin, tạo ra màu đỏ tím đặc biệt được đo ở bước sóng từ 473 đến 560 nm sử dụng máy quang phổ . TSC của một mẫu thực vật được xác định từ đường chuẩn với saponin tiêu chuẩn (ví dụ, aescin, axit oleanolic, diosgenin, quillaja saponin) và nó được biểu thị dưới dạng tương đương của chất chuẩn (ví dụ, mg đương lượng chuẩn trên g mẫu; hoặc g chất chuẩn tương đương trên 100 g mẫu).
Cách pha Thuốc thử vanilin sulfuric
Thử nghiệm axit vanilin-sulfuric để xác định TSC của nguyên liệu thực vật thường được thực hiện bằng cách
- Ủ 0,25 mL dịch chiết mẫu thực vật, chất chuẩn hoặc mẫu trắng (Bảng 1) với 0,25 mL 8% (w / v) vanilin trong etanol và 2,50 mL axit sulfuric 72% (v / v) trong nước trong 15 phút ở 60 ◦C trong nồi cách thủy lắc, với chất chuẩn và mẫu trắng được tạo thành bằng dung môi dùng để chiết cây mẫu (dung môi chiết) như trong Bảng 1.
Bảng 1 :
- Sau khi làm nguội trong nước ở nhiệt độ môi trường trong 5 phút, độ hấp thụ của chất chuẩn và chất chiết được đo ở bước sóng 560 nm bằng máy quang phổ Cary 50 UV-VIS (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) sau khi làm 0 bằng thuốc thử trắng (Bảng 1). TSC của các mẫu sau đó được biểu thị bằng mg đương lượng chuẩn trên một gam mẫu thực vật (mg SE g − 1).
